Chciałbym się zapytać czy spada wydajność kiedy użyje, require('./plik.php'); zamiast po prostu umieścić tresc pliku plik.php w skrypcie?

Nie przesadzaj.
Gdybys umieszczal wszystko w jednym pliku zrobilby sie niezly burdel.
Ewentualnie poczytaj o require_once(), require(), include(),include_once() i roznicach pomiedzy nimi.

no właśnie obecnie w skrypcie z 3000 linijkami mam problem, bo taki burdel się zrobił, że jak chcę coś edytować to nie wiem w co ręcę włożyć. To mówisz że wydajność nie spada?

Wydajnośc spada jak masz wszystko w jednym pliku. Parser na początku ładuje cały skrypt (sprawdza błędy składniowe itd), musi go 'przejrzeć' całego. A jak includujesz to dodajesz do pliku akurat te części, które w danym momencie są potrzebne. Przy okazji podziału skryptu na mniejsze części będzie bardziej czytelny, a do tego pewnie w rezultacie będzie mniej zajmował bo usuniesz kilka warunków, które musisz mieć teraz, żeby nie wywołać nieodpowiednich fragmentów kodu.
Generalnie lepiej więcej mniejszych plików ładowanych w miarę potrzeb, niż jeden kolos.
Pozdrawiam

Problemem wydajnosci zajmujesz sie jak masz w pip odwiedzin na stronie, a w dobrym tonie lezy takie pisanie aplikacji zeby byl porzadek w kodzie
Chcesz sie pobawic i sprawdzic to uzyj benchmark, przetestuj sobie.
Defakto po stronie serwera, w trakcie wykonywania skryptu i tak wszystko jest laczone w calosc do kupy .
Nalezy tak oddzielic fragmenty kodu aby wtedy kiedy nie byly potrzebne poprostu nie braly udzialu w trakcie wykonywania skryptu.